operacja skoliozy poznań

W transfekowanych CISTR-ACTFP komórkach C28 / I2, DA 125942 był silnie eksprymowany. re18527 zablokował transkrypcję; CISTR-ACTS nie wytworzył transkrypcji. (B) Ekspresja SOX9 została odrzucona w stosunku do wymieszanej kontroli siRNA. Zubożony PTHLH lub DA125942 w dół SOX9. zależne od siRNA wyczerpanie DA125942 regulowane pod wpływem PTHLH i SOX9, a ekspresja PTHLH była istotnie zmniejszona przez PTHLH, DA125942 i siRNA dla SOX9 (n = 6). (C) Nadekspresja PTHLH, SOX9 i DA125942 potwierdziła zależną od ekspresji sieć (n = 4). (D) STRING sieć. Analiza macierzy ekspresji ujawniła 22 geny morfogenezy narządów (GO: 0009887) pokazujące interakcje. Grubość linii wskazuje na pewność interakcji fizycznej lub funkcjonalnej. Mezenchymalne i prehondrogeniczne geny były różnie regulowane. (E i F) Fibroblasty dotkniętych pacjentów z BDE (AFF) i 3 nie poddanych wpływowi osobników (NON) były indukowane chondrogenowo. DA125942 był zwiększony u pacjentów z obu rodzin BDE (n = 3). (G) RNA-ChIRP na C28 / I2, niezmieniona osoba i chromatyna pacjenta BDE. DA125942 został pobrany w przeciwieństwie do GAPDH. (H i I) ChIRP na wyeluowanym DNA C28 / I2 wykrył wiązanie DA125942 w loci PTHLH i SOX9. Każdy amplikon został zmapowany przez niestandardowe ścieżki UCSC (ponumerowane czarne pola). (J i K) W t (4; 12) i t (8; 12) obserwowano zmniejszenie zajętości lncRNA w locus PTHLH; wiązanie przy SOX9 nie uległo zmianie (n = 2). *** P. 0,001; ** P. 0,01; * P. 0,05. lncRNA mogą wzmacniać i specyficznie wpływać na regulację genów w cis powyżej kilku Mb (19). Zaproponowaliśmy, że DA125942 może prowadzić w regulacji cis ekspresji PTHLH i jednocześnie może brać udział w regulacji trans SOX9. Aby przetestować ten problem, użyliśmy knockdown siRNA w komórkach C28 / I2, aby zniszczyć DA125942, PTHLH i SOX9. Wyczerpanie DA125942 spowodowało obniżenie poziomu PTHLH i SOX9. Niespodziewanie, powalenie PTHLH i SOX9 znacząco zwiększyło ekspresję DA125942 odpowiednio o 4- i 6,8-krotnie, co sugeruje odwrotne działanie tych produktów genowych na transkrypcję lncRNA. Wyciszanie SOX9 prowadziło do znacznej redukcji ekspresji PTHLH i odwrotnie (Figura 4B). Wyniki te implikowały interaktywny wpływ DA125942, PTHLH i SOX9 na poziomy transkryptów. Nadekspresja PTHLH lub SOX9 doprowadziła do podwyższenia poziomu DA125942, SOX9 lub PTHLH. Nadekspresja DA125942 stłumiła ekspresję genów kodujących (Figura 4C). Te dane potwierdziły zależność wyrażenia sieci. Gromada HOXC jest zlokalizowana 187 kb poniżej DA125942, a kilka lncRNA jest kodowanych przez loci HOX i współdziała z nimi (32, 33). Testowaliśmy, czy DA125942 regulował HOXC lub inne geny w cis lub w trans przez 3. profilowanie ekspresji. Nadekspresję i zubożenie DA125942 w komórkach C28 / I2. Połączona ANOVA dała 1,842 sond o ekspresji różnicowej (5% fałszywej stopy odkrycia [FDR]; Tabela dodatkowa 4). W celu rozróżnienia wzorców w górę i w dół przeprowadzono grupowanie k-średnich (dodatkowa figura 6A). Geny remodelujące chromatyny, tj. Metylotransferaza białkowa argininy (PRMT1), nukleosomalna domena wiążąca 2 o wysokiej ruchliwości (HMGN2), palec serdeczny z grupy polycomb 6 (PCGF6) i wzmacniacz homologu 2 zarodnika (EZH2) i kilka czynników transkrypcyjnych były różnie wyrażane w klastrach 1, 3, 4 i 5 (dodatkowa Figura 6B). W grupie 2 33 geny miały adnotacje łączące je z morfogenezą narządu (GO: 0009887; P = 7,51 × 10. 7); W sieci STRING wyłączono 11 genów jako pojedynczych (rysunek 4D). Oprócz PTHLH i SOX9 odkryliśmy istotne geny morfogenezy do modelowania wczesnych kończyn i chondrogenez. Czynnik indukujący niedotlenienie (HIF1A) reguluje SOX9 (34). Noggin (NOG) i folistatyna (FST) regulują wzrost i chondrogenezę w pączku kończyn kurzego (35, 36)
[więcej w: kobalamina, kozieradka zastosowanie, calmapherol ]